医疗废物样品的微生物检测方法一

国家尚未出台有关医疗垃圾管理的法规和制度，目前全国对医疗垃圾管理的主管部门是市卫生局，医疗垃圾由各医院自行管理、分散处理。由于医院垃圾处理设备是衡量一个医院档次水平的硬指标，所以各大医院在硬件设施上都比较完善，但在管理上却存在很大漏洞；效益差的医院和大部分规模小的医院，由于无钱购置设备或是为了节省费用，医疗垃圾不经处理直接混入生活垃圾排放，从而对全市人民的身体健康造成了潜在的威胁。
一、检测目的：
通过对医疗垃圾样品中某几项微生物指标进行检测，将检测结果与生活垃圾相应成分进行对照，以此来明确医疗垃圾的特殊危害；同时对部分进行简易焚烧的医疗垃圾的焚烧灰渣进行相关检测，明确其造成二次污染的潜在威胁，为今后有关医疗垃圾的调查、研究工作提供基础数据和参考依据。
二、检测原理：
通过对医疗垃圾所含以下几种微生物指标进行检测：
1、细菌总数
采用微生物平皿计数法。本法是一种常用的活菌记数法，它是依据在固体培养基表面形成的菌落数、而每个菌落应是由一个单细胞繁殖而来的原理⑴。
经培养，统计菌落数，按如下公式计算样品中含菌数。

2、大肠菌群数
采用复发酵法。由于大肠杆菌为好氧的产酸产气的革兰氏阴性菌，可用发酵管和伊红美兰培养基检查。乳糖发酵产酸，使指示剂溴甲酚紫变黄（其变色范围为 pH 5.2~6.8）；由于发酵管上浮，可看出产气。
伊红美兰培养基用于检查乳糖利用的情况。大肠杆菌分解乳糖产酸，使培养基pH下降，致使伊红与美兰相结合成紫黑色或紫红色化合物，故菌落呈紫黑色或紫红色，且有金属光泽（在碱性环境中，伊红、美兰不能结合，故不分解乳糖的细菌菌落呈无色）；伊红与美兰同时有抑制革兰氏阳性菌生长的作用⑴。
3、肠道致病菌的检测
主要检测沙门氏菌和志贺氏菌。
沙门氏菌属和志贺氏菌属是肠道治病菌中的两种主要类型，其代表菌种分别为伤寒杆菌和痢疾杆菌。对它们的检测是卫生检测中的重要一项。
检测方法分别是将样品加入四硫磺酸盐和革兰氏阴性杆菌增菌液中，培养6~12小时后，涂布于SS培养平板上，再培养24小时，观察菌落生长情况。对目的菌落再用多价血清检测确认⑵。
4、乙肝表面抗原检测
乙型肝炎病毒是乙型肝炎的病原体，其病毒学诊断主要靠血清学方法检测其表面抗原活性。在实验室中可采用乙肝表面抗原ELISA试剂盒作为一种简单有效的检测方法⑵。
三、主要检测步骤：
1、菌悬液的制备
称取样品 1g，放入 500ml 无菌生理盐水中，充分搅拌 30 分钟，静置 10 分钟，过滤，制得菌悬液，备用。
2、系列稀释
吸取菌悬液 0.5 ml 注入标有 10-1 的含有4.5ml 无菌生理盐水的试管中，系列稀释至 10-6 。
3、细菌总数测定
用无菌吸管吸取菌悬液 1 ml ，分别注入含有灭菌的肉膏蛋白胨培养基的大试管中，摇匀，倾注平板，凝固后 37℃ 倒置培养 24 小时。
计数平板上生长的菌落数，即为每毫升菌悬液中细菌总数。再换算为每克样品所含菌数。
4、大肠菌群的测定
⑴、初发酵实验
按下表所示，在各试管中添加乳糖培养液和菌悬液（试管中已放置倒管），混匀后 37℃培养 24 小时，检查产酸产气情况。

⑵、平板分离
取⑴中产酸产气和只产酸不产气的发酵管，取培养液分别接种于伊红美兰培养基上，37℃培养 24 小时。取发酵乳糖的典型菌落，半个进行涂片，作革兰氏染色。
⑶、复发酵实验
取⑵中 G—无芽孢杆菌的菌落的另一半接种在乳糖发酵管内，每管可接种从同一出发管内分离的典型菌落 1~3 个 37℃培养 24 小时，产酸产气者则证实为大肠菌群。
根据证实有大肠菌群存在的管数和接种水样量，查大肠菌群数检索表。
5、肠道致病菌检测
⑴、在试管中装入 10 ml 肠道致病菌培养液，再加入样品菌悬液 1ml ，37℃培养 6 小时。
⑵、采用平板划线法接种在 SS培养基平板上，37℃培养 24 小时。
⑶、挑取无色的可疑菌落，用多价血清凝集法验证。
6、乙肝表面抗原检测
四、检测结果记录与分析：
我们分别从不同医院采集了30个医疗垃圾样品，20个垃圾焚烧灰样品，为便于对照分析又采集了18个生活垃圾样品，进行了病原微生物检测实验。